southern杂交试剂盒

 

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DNA – PCR labeling，random primed labeling，Nick Translation

RNA- in vitro transcription

寡核苷酸- 3 End Labeling，3 Tailing

不同的标记方法各有差异，客户可根据起始模板浓度、模板是否需要纯化、探针检测浓度、探针应用等几个因素综合考虑，选择最佳的标记试剂盒，详见表1。

 

标记方法（试剂盒名称）	方法优点	起始模板量	可检测的标记探针	探针应用	方法评论
PCR labeling PCR DIG探针合成试剂盒 Cat#：11636090910	☆仅需少量的模板 ☆甚至可用不纯的模板 ☆相比于其他方法，需更少的优化步骤； ☆标记探针具高产量 ☆推荐用于非常短的探针（＜100 bp） ☆产生高灵敏度探针	☆质粒DNA，10- 100 pg（理想下用10 pg） ☆基因组DNA，1- 50 ng（理想状况下用10 ng）	0.10-0.03 pg DNA	☆基因组southern ☆northern ☆也可用于dot/slot、文库筛选和原位杂交	☆开始标记反应前在无 DIG-dUTP的情况下，优化PCR ☆模板浓度对产生灵敏度探针 非常 重要 ☆使用更少的DIG标记长探针 （＞1 kb） ☆勿用PCR DIG标记混合物 （DIG-dUTP:dTTP=1:20）替换试剂盒 内的标记混合（DIG-dUTP:dTTP=1:3）
Random primed labeling，high efficiency DIG-high prime DNA标记与检测起始试剂盒I Cat#: 11745832910 DIG-high prime DNA标记与检测起始试剂盒II Cat#: 11585614910	☆产生非常敏感的探针 ☆反应可扩大十倍	☆ 300ng DNA（针对可检测单拷贝基因的探针） ☆若标记反应反应过夜，模板量可更低	0.10-0.03 pg DNA	☆基因组southern blots ☆文库筛选 ☆也可用于dot/slot blots、northern blots	☆需要高纯度的模板 ☆非常敏感于不纯的模板 ☆用水或Tris buffer重悬模板。 勿用TE，因EDTA会一直标记反应
Nick Translation	☆允许控制探针长度（原位杂交实验非常重要）	☆ 1 μg DNA	主要用于原位杂交；灵敏度因检测方法而异；	☆原位杂交	☆需要高纯度的模板 ☆标记前模板不要变性
RNA labeling DIG Northern 起始试剂盒Cat#：12039672910	☆产生大量标记 ☆标记探针完全不含载体序列 ☆RNA探针是单链 ☆RNA探针用于northen印迹灵敏度比DNA探针高 ☆原位杂交实验中DIG-标记的RNA探针可轻易片段化	☆质粒DNA，线性化：1 μg ☆带启动子PCR 产物：100-200 ng	0.10–0.03 pg DNA 0.10–0.03 pg RNA	☆Northern ☆原位杂交 ☆文库筛选 ☆Dot/slot	☆需要高纯度模板
3 End Labeling DIG 寡核苷酸3末端标记试剂盒，第二代 Cat#：03353575910	☆仅需要少量的模板 ☆反应可无限扩大	☆100 pmol寡核苷酸	10 pg DNA	☆文库筛选 ☆Dot/slot bl ☆原位杂交	☆寡核苷酸应用HPLC或Elutips（Schleicherand Schuell）纯化 ☆探针不用纯化即可用于下游实验
3 Tailing DIG管核苷酸尾标记试剂盒，第二代 Cat#：03353583910	☆仅需少量模板 ☆相比于末端标记法产生更灵敏的探针 ☆反应可无限扩大	☆100 pmol寡核苷酸	1 pg DNA	☆文库筛选 ☆Dot/slot ☆原位杂交	☆寡核苷酸应用HPLC或Elutips（Schleicherand Schuell）纯化 ☆探针不用纯化即可用于下游实验