GV3101感受态细胞

GV3101感受态细胞

GV3101 Competent cell

GV3101感受态细胞基因型：

C58 (rif^R) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gent^R/strep^R) Nopaline

GV3101感受态细胞产品简介：

       GV3101菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱性Ti质粒pMP90(pTiC58DT-DNA)，此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必须的元件，pMP90(pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但是可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）。pMP90(pTiC58DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：Strep和gent。赋予GV3101菌株链霉素和庆大霉素抗性，适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作，经植物双元pCambia2301M质粒检测，转化效率可达10³cfu/μg。-80℃保存几个月转化效率不发生改变。

GV3101感受态细胞操作方法（采用冻融法）：

1.        取-80℃保存的GV3101农杆菌感受态细胞于冰上或室温融化。

2.        在无菌条件下，向刚刚化冻的感受态细胞悬液中加入1μg需要转化的质粒DNA，轻轻混匀，冰水浴中静置10min。

3.        将离心管置于液氮中速冻5min。（也可以用干冰和无水乙醇混合物代替液氮）

4.        快速将离心管置于37℃水浴中保持5min，不要晃动水面。

5.        将离心管放回冰水浴中，再保持5min。

6.        无菌条件下加入800μl无抗生素的2×YT或LB液体培养基，于28℃震荡培养2~3小时。目的是使菌体复苏并表达抗生素抗性。

7.        5000rpm离心1min收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌体，加到相应抗生素的LB固体培养基平板上，用无菌的细菌涂布器或玻璃珠将细胞均匀涂开。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。

注意事项：
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

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