MG1655(DE3) 感受态细胞

                                                         MG1655(DE3) 感受态细胞

MG1655(DE3) Chemically Competent Cell

目录编号            产品名称             包装单位

Huayueyang9982    MG1655(DE3) 感受态细胞   10x100ul

备注:以上包装均含有Compcell Control Plasmid pUC19(0.1ng/ul)5ul(质量控制用)。储存:-70℃ 保存六个月。

MG1655(DE3) 感受态细胞产品介绍:

huayeyang生产的 MG1655(DE3)感受态细胞是采用特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于 DNA的化学转化。

基因型为:K12 F入-ilvG-rfb-50 rph-1(DE3)

MG1655(DE3) 感受态细胞产品特点:

MG1655(DE3)菌株来源于 W1485，是K12 的衍生菌株，是一种经过较少改造、比较接近于“野生型”的大肠杆菌工程菌株。MG1655(DE3)外观形态标准，既可做为扩增大肠杆菌野生型基因的横板使用也可作为蛋白表达的宿主菌株使用;T7 RNA 聚合酶位于入噬菌体 DE3 区，该区域被整合于MG1655 的染色体上，该菌株不含核酸酶 endAl 突变。

操作步骤:

MG1655(DE3) 感受态细胞以下操作均按无菌条件的标准进行:

转化:取感受态细胞置于冰浴中(解冻1-2分钟),加入目的DNA.轻轻混匀,在冰浴中放置 30 分钟。

注意:所使用 DNA 体积不要超过感受态细胞悬液体积的 1/10.

■热激:将离心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却 2-3分钟,该过程不要摇动离心管。

■复苏:向每个离心管中加入 500ul 无菌的 SOC 或 LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃ 180rpm摇床振荡培养 45-60 分钟，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

口涂板:根据实验要求(质粒，重组连接产物转化)，吸取适量体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的 SOC 或 LB 固体琼脂培养基上，将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养 12-16 小时。

MG1655(DE3) 感受态细胞提示:，刚刚化冻的细胞，转化效率最高。化冻后感受态细胞冰浴条件下，半小时内活性无明显变化，大此，同时转化多支感受态细胞时尽量半小时内加完目的 DNA。，感受态细胞应保存在-70℃，请避免反复冻融，以免降低感受态细胞的转化效率。，进行转化操作时，请在无菌条件下，根据相应温度要求进行实验。·避免用移液枪吹吸，整个过程要轻柔，尽量低温操作。

为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低，

。由于此感受态细胞转化效率较低;为了更好的实验效果,华 越洋建议至少转入 100ng 以上质粒,取 1/3，以上复苏后菌液涂板;否则有可能转化失败。

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