F-TOP10快速转化感受态细胞

F-TOP10快速转化感受态细胞

F-TOP10 Competent Cell

F-TOP10感受态细胞基因型：
F^- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (Str^r) endA1 nupG
 
F-TOP10感受态细胞说明：
TOP10菌株来源于MC1061，是目前实验室最常用的感受态细胞之一，基因型与DH10B高度类似 (DH10B为galE15型，而TOP10为galU型)。TOP10生长速度快，37℃，10小时可见克隆。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。可用于构建克隆，蓝白斑筛选等实验。
 
F-TOP10感受态细胞经特殊工艺制作，无需42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min内完成转化、涂板操作，pUC19质粒检测转化效率可达1~5×10⁸ cfu/μg DNA。

F-TOP10感受态细胞操作方法：
1. 提前将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热
2. F-TOP10感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀,，冰中静置5分钟。
3. 用200ul枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的2YT或LB培养基上。
4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少13 h。
 
F-TOP10感受态细胞注意事项：
1. F-TOP10快速转化感受态细胞也可进行热激操作，对于>7 kb质粒的构建，为了提高转化效率可按以下步骤操作：F-TOP10感受态细胞从-80℃拿出，插入冰中，5分钟后，加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置20分钟。42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中静置2分钟。加入700 μl LB，37℃，200 rpm复苏30分钟，涂板。
2. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
3. 混入目的DNA时应轻柔操作。
4. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

F-TOP10感受态细胞保存条件： -80℃

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