北京华越洋生物
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pBApo-EF1α-pur

pBApo-EF1α-pur

pBApo-EF1α-pur

 

编号

载体名称

北京华越洋生物VECT6019

pBApo-EF1α-pur

                                  

pBApo-EF1α-pur载体基本信息

载体名称:

pBApo-EF1α-pur

质粒类型:

哺乳动物细胞表达载体

高拷贝/低拷贝:

低拷贝

克隆方法:

限制性内切酶,多克隆位点

启动子:

EF1α

载体大小:

4972 bp

5' 测序引物及序列:

--

3' 测序引物及序列:

--

载体标签:

无标签

载体抗性:

氨苄青霉素

筛选标记:

嘌呤霉素(Puromycin

克隆菌株:

TOP10, DH5α, JM109

宿主细胞(系):

常规细胞系,293CV-1CHO

备注:

pBApo-EF1α-pur载体可用来表达microRNA和其它转录产物;
 
很容易将{promoter+ORF+PolyA signal}框转移到腺病毒 载体上,用于构建腺病毒载体。

稳定性:

瞬表达 稳表达

组成型/诱导型:

组成型

病毒/非病毒:

非病毒

pBApo-EF1α-pur载体质粒图谱和多克隆位点信息


 

pBApo-EF1α-pur载体简介

pBApo-EF1α-pur DNA是一种简单的应用于哺乳动物细胞的基因表达载体。该载体具有人多肽链延伸因子基因来源的启动子 (EF1α promoter)、单纯疱疹病毒胸苷激酶来源的polyA信号、新霉素抗性基因。通过在MCS区域插入目的基因的开放阅读框 (ORF),构建目的基因表达载体。除了通常的基因以外该载体可以用于pri-microRNA的转录。此外,还可以很容易地将 (promoterORFPolyA signal) 从这个载体上转移到腺病毒载体上,尤其是转移到Adenovirus Dual Expression Kit 的组分pAxcwit上。腺病毒载体感染效率高,范围广,可以用于体外和体内的基因转导。

 

使用方法

 

1. 插入基因

在质粒载体的克隆位点处插入目的基因的开放阅读框(ORF)。因为载体上有氨苄青霉素抗性基因,可以从大肠杆菌中筛选重组体。

 

2. 转染

使用 TransIT 系列、Xfect 系列(Clontech)等转染试剂将质粒导入细胞内。转染条件请参考转染试剂的实验流程。

 

3. 转染细胞的筛选

pBApo-EF1αNeo DNA 具有新霉素抗性基因、pBApo-EF1αPur DNA 具有嘌呤霉素抗性基因,可以利用抗生素筛选转染细胞。在质粒转染后培养 24 小时以上,开始使用抗生素筛选。在细胞密度较高的情况下,可以适当地稀释细胞后重新培养。每 34 天更换含抗生素的培养基。通常 12 周可以获得转染细胞的克隆。由于不同细胞对抗生素的耐药性不同,需要研讨适合的抗生素浓度。通常 NeoR(新霉素)浓度为 5001,000μg/mlPurR(嘌呤霉素)浓度为 13 μg/ml

 

4. 置换表达框(unit

pBApo-EF1α系列载体经过 Cla I EcoR V 酶切,将表达框(unit)(EF1a promoter+插入基因+PolyA signal)从质粒中切出,可以轻易地转移至其他载体上。特别是 Adenovirus Dual Expression Kit,该载体多克隆位点上有 Cla I Smi I 酶切位点,可以很轻易地将表达框转移至腺病毒载体上。(EcoR V Smi I 都产生是平滑末端,适合片段与腺病毒载体连接)

 

其他哺乳动物表达载体:

pEBVHis   A

pcDNA5/TO

pDsRed2-Bid

pNFκB-MetLuc2-Reporter

pGL4.10

pBApo-CMV-neo

pAcGFP1-N1

pEF1α-IRES-DsRed-Express2

pGL4.29

pDsRed-Monomer

pSecTag2   A

pCMV-DsRed-Express2

pGL4.13

pIRES

pGL4.27

pcDNA3.1/NT-GFP-TOPO

pG5   luciferase

pIRES-hrGFP-1a

pGL4.26

pEF1α-IRES-ZsGreen1

pCMV-AD

pDsRed-Express2-N1

pACT

pCMV-Tag   2A

pRevTet-Off

pCMV-Tag   3B

pBIND-Id   Control

pCMV-Tag   5B

pTet-Off

pCRE-hrGFP

pTRE2

pAcGFP1-C   In-Fusion Ready

pTRE2-hygro

pDsRED2-Mito

pRevTRE

p3XFLAG-CMV-14

pVgRxR

pAcGFP1-F

pTK-hyg

p3XFLAG-CMV-8

pOPI3CAT

pAcGFP1-C1

pTRE3G-Luc

pFLAG-CMV-2

pBK-RSV

pAsRed2-C1

pSwitch

pcDNA3.3-TOPO

pIRES2-DsRed2

pAsRed2-N1

pcDNA4/His   C

pcDNA6.2/cLumio-DEST

pCMV-Myc

pAcGFP1-Lam

c-Flag   pcDNA3

pCMV-tdTomato

pCMV-Tag   2C

pAcGFP1-C

pcDNA4/TO/Myc-His   A

pAcGFP1-Mito

pCMV-Tag   5A

pSEAP2-Basic

pcDNA6/myc-His   B

pAcGFP1-N   In-Fusion Ready

pCMV-Tag   3C

pBI-CMV3

pcDNA6/V5-His   B

pDsRed-Monomer-N   In-Fusion Ready

p3XFLAG-CMV-7

pNFkB-DD-tdTomato

pcDNA6.2/nTC-Tag-DEST

pcDNA4/TO/Myc-His   B

p3XFLAG-CMV-9

pcDNA3.1/His   A

pOptiVEC-TOPO

pIRES2-EGFP

pFLAG-CMV-4

pEBVHis   B

pcDNA5/FRT

pcDNA3.1/His   C

pBI-CMV4

pGL4.75

pGL4.30

pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO

pcDNA4/His   A

pGL4.20

pGL4.19

pEF1α-IRES-AcGFP1

pcDNA4/myc-His   B

pCMV-SPORT6

pACT-MyoD

pcDNA3.2/V5/GW/D-TOPO

pcDNA4/HisMax   C

pCMV-SPORT6

pCMV-BD

pcDNA4/TO/Myc-His/LacZ

pCMV-Tag   4A

pBIND

pCMV-Tet3G

pcDNA4/HisMax-TOPO

pcDNA6/myc-His   C

pBD-NF-κB

pTet   on advanced

p3XFLAG-CMV-13

pCMV-Tag   2B

pRevTet-On

pTRE-Tight

p3xFLAG-CMV-10

pGRN145

pTet-On

pIND

pFLAG-CMV-3

pCMV-MEK1

pTRE3G

pGene/V5-His   B

pcDNA4/TO/Myc-His   C

pCMV-Tag   3A

pcDNA4/TO

pOPRSVI

pcDNA6.2/C-YFP-DEST

pCMVLacI

pcDNA4/His   B

pcDNA4/HisMax   A

pcDNA6.2/cTC-Tag-DEST

pBI-CMV1

pcDNA4/HisMax   B

pIRESpuro3

pcDNA6.2/nGeneBLAzer-DEST

pEF1α-AcGFP1-N1

pcDNA4/myc-His   C

pIRESneo3

pCRE-MetLuc2-Reporter

pCMV-LacZ

pcDNA3.1/His   B

pIRESneo2

pEF1α-DsRed-Express2

pCMV-Tag   4B

pcDNA6/V5-His   C

pcDNA4/myc-His   A

pDsRed-Express-C1

pCMV-Tag   5C

pCHO1.0

pCMV-PKA

pEF1α-DsRed-Monomer-N1

plRES2-ZsGreen1

pGL3-Promoter

pAcGFP1-N3

pDD-AmCyan1   Reporter

p3XFLAG-CMV-7.1

pCMV-MEKK1

pcDNA5/FRT/TO

pCRE-DD-AmCyan1

pFLAG-CMV-5a

pFLAG-CMV2

pBApo-CMV-Pur

pIRES2-DsRed-Express2

pBudCE4.1

pAcGFP1-C2

pBApo-EF1α-pur

pDsRed-Express-N1

pREP4

ptdTomato-C1

ptdTomato-N1

pcDNA6.2/nLumio-DEST

pBApo-CMV

pCRE-DD-tdTomato

pAcGFP1-Golgi

pcDNA6/myc-His   A

pIRES2-AcGFP1

pAcGFP1-Hyg-C1

pAcGFP1-p53

pcDNA6/V5-His   A

pIREShyg3

pAcGFP1-Mem

pAcGFP1-Actin

pcDNA5/FRT/TO-TOPO

pcDNA6/TR

pAcGFP1-C3

pBI-CMV2

pcDNA6.2/V5/GW/D-TOPO

pDsRed-Express2-C1

pTT5

pEF1α-tdTomato

pcDNA6.2/cGeneBLAzer-DEST

pBI-CMV5

pSEAP2-Control

pAmCyan1-C1

pcDNA6.2/nGeneBLAzer-GW/D-TOPO