DNA去磷酸化试剂盒

编码

品名

规格

单位

北京华越洋生物

GT151-20T

DNA去磷酸化试剂盒

 

20T

北京华越洋生物

GT351-100T

DNA去磷酸化试剂盒

100T

DNA去磷酸化试剂盒,DNA去磷酸化试剂

产品及特点    分子克隆时,载体的自连极大降低了连接效率,而对载体DNA两个5′端的-PO4基团进行去磷酸化处理可以抑制自连反应。此外在进行DNARNA5′端标记前,也需要将其本来的-PO4基团去除再加上标记基团。本公司开发的DNA去磷酸化产品就是针对这一目的而开发。

DNA去磷酸化试剂盒,DNA去磷酸化试剂

它具有下列特点:

1.    基于细菌碱性磷酸酶,反应在较高温度进行,效率更高。

2.    DNARNA 5′端的-PO4基团变成-OH基团,丧失连接能力。

3.    模板可以是单链,也可以是双链,既可以是DNA,也可以是RNA

4.    处理后的核酸纯化后可以直接用于连接反应和标记反应。

5.    本产品足够20次去磷酸化实验。

DNA去磷酸化试剂盒,DNA去磷酸化试剂

 

规格及成分                     塑料包装

10×去磷酸缓冲液       100 μL

细菌碱性磷酸酶(0.5U/μL    50 μL

超纯水                 1 mL

DNA去磷酸化试剂盒,DNA去磷酸化试剂

 

运输及保存   低温运输,-20℃保存,有效期为6个月。

自备试剂       核酸片段

 

使用方法       注意:dNTPATP也是碱性磷酸酶的底物,所以如果核酸溶液中有dNTPATP,一定要先将其去除。否则它们会耗掉大量的碱性磷酸酶,降低DNA去磷酸化效率。

 

1  在微量离心管中配制下列反应液(50μL):

              

DNA片段      不超过10 pmol

10×去磷酸缓冲液       5 μL

细菌碱性磷酸酶    2.5 μL

超纯水到            50 μL

2  65℃反应30分钟。如果是RNA样品,建议在37℃反应30分钟。

3  酚氯仿抽提去除酶活性,乙醇沉淀DNA待用(见附)。

 

附:酚/氯仿抽提DNA、乙醇沉淀浓缩DNA(本试剂盒不提供相关试剂,需要从华越洋另购相关试剂,下列操作仅供参考)

 

1  50 uL DNA溶液中加入50 uL超纯水增加体积,以免纯化过程中DNA丢失。如果有必须,可以加入和4uL核酸助沉剂提高回收效率。

2  加入100uL/氯仿/异戊醇25241混合液震荡半分钟混匀,室温12000g离心3分钟,转移上清到新离心管中。

3  重复上步操作一次。

4  0.1倍体积(即10uL)的3 M 乙酸钠溶液(pH 5.2)。

5  再加入2.5倍体积(即250uL)的无水乙醇。

6  混匀后12000g 4℃离心10分钟,小心弃上清。

7  加入1mL 70%乙醇,短暂离心3分钟后小心弃上清。

8  短暂离心5秒,吸弃残留液体(约30-50uL)。

9  室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA,立即使用或放-20℃长期保存。

 

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