BCA蛋白浓度测定试剂盒

 

品名

规格

  品牌

单位

 货号

BCA蛋白浓度测定试剂盒

500T

waryong

北京华越洋生物

GT15-500T

BCA蛋白浓度测定试剂盒

2000T

waryong

北京华越洋生物

GT15-2000T

BCA蛋白浓度测定试剂盒

 

保质期:本试剂盒自订购之日起一年内有效。

BCA蛋白浓度测定试剂盒

产品内容:                          

 

包装(500微孔)

保存

BCA试剂

100ml

室温

Cu试剂  

3ml

室温

PBS稀释液

30ml

室温

BSA蛋白标准 (5mg/ml BSA)

1ml

-20

BCA蛋白浓度测定试剂盒

产品简介:

     碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+ Cu+BCA试剂形成紫蓝色的络合物,测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。常用浓度的去垢剂SDSTriton X-100Tween不影响检测结果,但受螯合剂(EDTAEGTA)、还原剂(DTT,巯基乙醇)和脂类的影响。实验中,若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高,可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

BCA蛋白浓度测定试剂盒

操作说明:

. 微孔酶标仪法

     1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂(50:1)配制成BCA工作液,充分混匀(混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)BCA工作液室温24小时内稳定。

     2. 稀释标准品:取10微升BSA标准品用PBS稀释至100微升(样品一般可用PBS稀释),使终浓度为0.5mg/ml。将标准品按0, 2, 468, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白标准品孔中,加PBS补足到20微升。

     3.   将样品作适当稀释(最好多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。

     4. 各孔加入200微升BCA工作液,37℃放置15-30分钟。用酶标仪测定A562nm,根据标准曲线计算出蛋白浓度。使用温箱孵育时,应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

. 分光光度计法

         如没有酶标仪,可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。

         步骤如下:

         1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂(50:1)配制成BCA工作液,充分混匀(混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)BCA工作液室温24小时内稳定。

         2. 稀释标准品:取100微升BSA标准品用PBS稀释至1ml(样品一般可用PBS稀释),使终浓度为0.5mg/ml

         3. 取八支(或者更多)5ml离心管,标上号,按下表加入试剂。

          

离心管号

1

2

3

4

5

6

7(样品管1

8(样品管2

9(样品管3

标准蛋白BSA

0

40ul

80ul

120ul

160ul

200ul

200ul适当稀释的样品1

200ul适当稀释的样品2

……

PBS

200ul

160ul

120ul

80ul

40ul

0

0

0

0

BCA工作液

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

         4. 37℃放置15-30分钟。用分光光度计测562nm处吸光值,根据标准曲线计算出蛋白浓度。

BCA蛋白浓度测定试剂盒

注意事项:

    1. 长期不用时,Cu试剂与PBS稀释液可置于2-8℃保存,如发现细菌污染则应丢弃。BCA试剂在低温条件下出现结晶沉淀时,可37℃温育使其完全溶解, 不影响使用。

  2. 样品中若含有较多干扰物质时,请采用Bradford蛋白浓度测定试剂盒

  3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

 

 

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