NMY51酵母感受态细胞

NMY51 Chemically Competent Cell



 产品编码

 产品名称

品牌 

 规格

  WX145-100S

NMY51酵母感受态细胞

waryong  

 10*100ul

WX145-100

NMY51酵母感受态细胞

waryong   

 20*100ul


NMY51 Chemically Competent Cell 产品说明书


NMY51:                      10×100μl            保存条件:- 80℃

PGADT7(control vector):10ng/μl     10μl            保存条件:  4℃

Carrier DNA:            5ug/μl   100  μl            保存条件: -20℃

PEG/LiAc :                       5  ml            保存条件:  4℃


NMY51酵母感受态细胞基因型

MATa his3Δ200 trp1-901 leu2-3,112 ade2 LYS2::(lexAop)4-HIS3 ura3::(lexAop)8-lacZ ade2::(lexAop) 8-ADE2 GAL4

 

NMY51酵母感受态细胞操作方法

1. 取100 ul冰上融化的NMY51感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5ug,Carrier DNA(95-100度5min快速冰浴,重复一次)10 ul ,PEG/liAC  500ul并吸打几次混匀,30度水浴30 分钟(15 min时翻转6-8次混匀)。

2. 将管放42度水浴15min  (7.5 min时翻转6-8次混匀)。  

3. 5000 rpm 离心 40s 弃上清,ddH2O 400ul 重悬,离心 30s 弃上清。                      

4. ddH2O 50ul重悬,涂板,29℃培养48-80h。

 

Preparation of Media:

YPDA (1L):

 Tryptone               20g

 yeast extract            10g 

 0.2% adenine           15ml

 补水到 950ml,  用盐酸调PH到6.5

 Agar                20g (for plates only)

 121度,15分钟高压灭菌,待培养基温度降到55度时,加入已过滤的40% 葡萄糖 50 ml

 

0.2% adenine(1L)

 Adenine    2g

 补水     到1L

 溶解后高压灭菌

 或0.22um 滤膜过滤除菌

 

NMY51酵母感受态细胞注意事项

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

4. NMY51酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。

5. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃,48h培养可见直径1mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60h培养可见直径1mm克隆,涂SD双缺平板29℃,60-80h培养可见直径1mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培养可见直径1mm克隆。

 

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