T1感受态细胞



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T1感受态细胞100ul*20waryongGX5137-100
T1感受态细胞100ul*10waryongGX5137-100s

产品是采用大肠杆菌Mach1-T1 Phage Resistant菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。本产品具有下列特点:

1. 本感受态细胞是目前生长速度最快的感受态细胞,在氨苄青霉素平板上,8-9 h可见克隆;用于蓝、白斑筛选,12 h可见蓝斑;将过夜培养的单克隆在2 ml的LB 培养基中培养4-5 h即可进行小量质粒提取。

2. 适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,减少克隆DNA同源重组的发生,提高质粒DNA的产量和质量。

3. 本产品具有T1,T5 噬菌体抗性。

4. 使用pUC19 质粒检测,转化效率可达10cfu/μg。

5. 菌株基因型为:F- φ80(lac Z) ΔM15 ΔlacX74 hsdR(rkmk+) ΔrecA1398 endA1 tonA

使用方法:

干冰运输、-80℃保存,有效期半年。

1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL,可以根据实际情况分装使用。

以下实验以50 μL感受态细胞为例

2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μL感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。

3. 42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。

4. 每个离心管中加入450 μL无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混后置于37℃摇床,150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。

5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16 小时。


注意

1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200-300 μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000 rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。


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