T1感受态细胞

T1感受态细胞

产品是采用大肠杆菌Mach1-T1 Phage Resistant菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。本产品具有下列特点：

1. 本感受态细胞是目前生长速度最快的感受态细胞，在氨苄青霉素平板上，8-9 h可见克隆；用于蓝、白斑筛选，12 h可见蓝斑；将过夜培养的单克隆在2 ml的LB 培养基中培养4-5 h即可进行小量质粒提取。

2. 适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，减少克隆DNA同源重组的发生，提高质粒DNA的产量和质量。

3. 本产品具有T1，T5 噬菌体抗性。

4. 使用pUC19 质粒检测，转化效率可达109 cfu/μg。

5. 菌株基因型为：F- φ80(lac Z) ΔM15 ΔlacX74 hsdR(rkmk+) ΔrecA1398 endA1 tonA

使用方法：

干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。

以下实验以50 μL感受态细胞为例。

2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μL感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。

3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。

4. 每个离心管中加入450 μL无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。

5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16 小时。

注意：

1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300 μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000 rpm，2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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